新穎的重組桿狀病毒載體及其用途Recombinant baculovirus vector and uses thereof

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

美國

專利申請案號

14/478,870

專利證號

US 9,328,147 B2

專利獲證名稱

新穎的重組桿狀病毒載體及其用途Recombinant baculovirus vector and uses thereof

專利所屬機關 (申請機關)

中原大學

獲證日期

2016/05/03

技術說明

豬瘟病毒(Classical swine fever virus; CSFV) 及豬第二型環狀病毒(Porcine circovirus type 2; PCV2) 是兩種危害豬隻健康的感染性病毒，疫情爆發後常導致養豬業重大的經濟損失。豬瘟病毒的E2蛋白及豬的環狀第二型病毒的Cap蛋白為現今開發疫苗最主要使用的抗原蛋白，在此計畫中，我們引進2A相似序列於桿狀病毒表現系統中發展可等量表現豬瘟病毒的E2蛋白及豬的環狀第二型病毒的Cap蛋白的多效桿狀病毒表現系統，以開發可用以防治CSFV和PCV2的雙價疫苗，同時利用核醣體內轉譯子(internal ribosome entry site; IRES)再同時表現綠螢光蛋白(green fluorescence protein; GFP)與真菌免疫調節蛋白FIP-FVE (fungal immunolmodulatory proteins Flammunlina velutipes)。 共表現綠螢光蛋白除可方便重組桿狀病毒的篩選外亦利於重組病毒力價的測定，共表現免疫調節蛋白FIP-FVE則可增強豬隻的免疫反應進而達到減少施打疫苗的劑量。 我們已成功構築pBac-E2-2A-PCV2-PnV339-E-Rhir-FVE之重組轉移質體並成功製備及挑選 vAc-E2-2A-PCV2-PnV339-E-Rhir-FVE重組病毒。利用Western blot確認CSFV-E2、PCV2-cap及FVE可於vAc-E2-2A-PCV2-PnV339-E-Rhir-FVE重組病毒感染之Sf21細胞成功的表現，同時以免疫螢光分析PCV2-cap表現於細胞核中。位定量所表現的抗原我們也建立PCV2-cap蛋白的ELISA分析，線性範圍為0-2000 ng/ml。並由合作廠商生展生物科技公司完成初步量產測試，vAc-E2-2A-PCV2- PnV339-E-Rhir-FVE重組病毒生產之抗原量約為1.66-4.99 mg/l 。 The E2 structural protein of CSFV and capsid protein of PCV2 are the main antigens to induce protection immune response to protect CSFV and PCV2, respectively. In this study, we had incorporated the 2A like sequence into the baculovirus genome to generate a recombinant baculovirus that can equally express both E2 structural protein of CSFV and capsid protein of PCV2. Furthermore, we also employed the internal ribosome entry site to co-express the green fluorescent protein EGFP and fungal immunomodulatory proteins Flammunlina velutipes (FIP-FVE). Western blot analysis had revealed the successfully expression of the two antigens; CSFV-E2 and PCV2-cap, with FIP-FVE. Besides, immunofluorescence assay also revealed the nucleoocalization of the heterologus expression recombinant PCV2-cap protein.Thus, we had proofed that the 2A and IRES can be combined and used to constructed tetra-expression vector.

備註

本會(收文號1120007559)同意該校112年2月7日原產字第1120000364號函申請終止維護專利(中原大學)

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