METHOD FOR DETECTING LIVE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

美國

專利申請案號

16/152,942

專利證號

US 11,453,918

專利獲證名稱

METHOD FOR DETECTING LIVE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

專利所屬機關 (申請機關)

國立清華大學

獲證日期

2022/09/27

技術說明

結核桿菌Mycobacterium tuberculosis (TB)的感染長久為全球公共衛生的重大挑戰。由於TB生長速度十分緩慢，使得快速檢測更為不易。現在市面上已有TB 專一性的DNA探針，以分子生物診斷技術而言，以聚合酶鏈鎖反應可偵測TB是否存在。可是以DNA為模板進行聚合酶鏈鎖反應並無法判別細菌的存活與否，不適用於用藥後的快速癒後評估。故本技術在進行聚合酶鏈鎖反應分子檢測時，先加入使用溴化丙錠（Propidium monoazide, PMA）以判別細菌之存活與否。PMA 混合含菌樣本中，以藍光激發反應，PMA會嵌合進死菌DNA而使死菌之聚合酶鏈鎖反應不能進行，繼而區分活菌和死菌。另外本技術結合整合分子診斷平台，包括檢體前處理、微型聚合酶連鎖反應技術、螢光分析技術，把檢體加以純化、濃縮、分離並全自動進行聚合酶鏈鎖反應，最後透過光電倍增管測量即時螢光訊號，並在電腦上顯示。爲使用者建立一標準化的程序，免除了人為操作的感染危險及誤差。操作時只需將微量檢體置入整合型分子診斷平台上樣品容器槽中，再將晶片置入儀器內插槽中，即會自行操作、檢測，並完成最終數據分析。 Mycobacterium tuberculosis (TB) infection poses a huge challenge worldwide. It is challenging for rapid identification of TB due to its low growth rate, and therefore it could be widely spread. For this reason, a novel combination of propidium monoazide (PMA) and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was reported in this work for fast detection of live TB. Experimental results showed that the PMA-RT-PCR protocol can detect live TB with a detection limit. Furthermore, PMA could be used successfully to distinguish dead TB such that no PCR products could be generated. This is the first time that an integrated microfluidic system was demonstrated to use molecular diagnostics for fast detection of TB and could be potentially used for prognosis monitoring of TB treatment.

備註

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