一種使大腸桿菌大量表現丙酸基因與合成聚羥基丁酯-羥基戊酯Method to Produce PHBV by Recombinant Escherichia Coli

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

美國

專利申請案號

13/482,422

專利證號

US 8,859,246 B2

專利獲證名稱

一種使大腸桿菌大量表現丙酸基因與合成聚羥基丁酯-羥基戊酯Method to Produce PHBV by Recombinant Escherichia Coli

專利所屬機關 (申請機關)

元智大學

獲證日期

2014/10/14

技術說明

本發明揭露使用單一質體，同時攜帶phaCAB基因與prpE基因，在大腸桿菌中表達，生產聚羥基丁酯-羥基戊酯之方法。經由調整培養基中丙酸之濃度，可以得到不同比例之羥基戊酯之高分子聚合物。文獻上曾經使用大腸桿菌生產PHBV，然而需要同時以兩種質體分別攜帶phaCAB基因來產生合成PHB所需要的酵素蛋白以及與丙酸代謝之相關基因prpE。然而利用兩種不同質體建構之重組菌株，在實際生產時會面臨到培養基中須同時添加兩種抗生素，以及無法實際掌控兩種質體存在菌株體內之數目與比例。本發明將重組大腸桿菌所需之所有基因構築於單一質體，包括phaCAB，vgb與prpE等基因。實驗證實了攜帶此一質體的大腸桿菌菌株確實會產生PHBV產物。藉由調控培養基的組成以及所含丙酸之濃度，我們可以利用此菌株生產數種含不同比例之羥基戊酯(約5% - 35%不等)之聚羥基丁酯-羥基戊酯聚合物。 The invention discloses a method for production of polyhydroxybutyrate-co-polyhydroxyvalerate (PHBV) by recombinant Escherichia coli. PHBV can be obtained from the recombinant E. coli cultivated in the medium containing propionic acid. The production of PHBV by recombinant E. coli has been noted before; however all of these strains need to harbor two plasmids to carry phaCAB and prpE, respectively. The culture medium therefore needs to be supplemented with two different kinds of antibiotics. In this patent, we provide a method that integrated genes (i.e. phaCAB, vgb and prpE) required for PHBV production into a single plasmid. The plasmids were then transformed into an E. coli host. Results showed that PHBV can be produced by this recombinant E. coli, and the ration of HV to HB in the co-polymers can be regulated by addition of different concentrations of propionic acid in the medium. The percentage of HV in the co-polymers can be adjusted from about 3% up to more than 35%.

備註

本部(發文號1080011801)同意該校108年2月18日元智研字第1080000159號函申請終止維護專利。

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