用於鑑定蛋白質或胜肽N端胺基酸的套組及方法

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

097121520

專利證號

I 351518

專利獲證名稱

用於鑑定蛋白質或胜肽N端胺基酸的套組及方法

專利所屬機關 (申請機關)

國立成功大學

獲證日期

2011/11/01

技術說明

由於a1離子的訊號增強，二甲基同位素標定對於鑑定蛋白質以及胜肽非常有用。二甲基修飾的胜肽其a1離子的訊號增強且搭配使用氘試劑，可以使得二甲基修飾與人體內已有修飾的N端蛋白質有所區別。因此，序列以及N端修飾可以藉由MS/MS質譜圖清楚地標示出來。在此研究中，利用標準蛋白混合物(血紅素、肌紅蛋白、乳白蛋白)來確認標定完整性以及分離效果。這三種蛋白其N端都成功地鑑定出來。這方法也應用在MCF-7細胞上，結果得到分離出來的胜肽有80%是蛋白質的N端，且大部份符合已知N端切割或是推論可能是N端切割，例如蛋胺酸的移除以及乙醯化。除此之外，利用二甲基同位素標定搭配親和性選擇之策略我們鑑定出在Ig K chain V-III region SIE蛋白N端新的甲酸化修飾以及profilin蛋白N端的訊息序列。 Because of enhanced a1 ion signals, dimethyl labeling is useful for identifying the N-termini of proteins or peptides. Owing to the unique feature of a1 signal enhancement associated with dimethylated peptides and the use of the deuterium reagent, the in vitro blocked (or in vivo free) N-termini of proteins could be easily differentiated from the in vivo blocked N-termini. Thus, their sequences and N-terminal modifications could be assigned unambiguously from MS/MS spectra. In this study, the completeness of the labeling and the efficiency of the isolation method were first confirmed by the use of a mixture of model proteins composed of hemoglobin, myoglobin, and α-lactalbumin. The N-termini of all three proteins, including both β and α chains of hemoglobin as well as a signal sequence located in the N-termini of α-lactalbumin, were successfully identified.When this protocol applied to MCF-7, it still works.

備註

本部(收文號1030091075)同意該校103年12月25日成大研總字第1034500872號函通報專利權讓與(成大)

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