發明
中華民國
105102878
I 602915
幹細胞培養裝置、其形成方法、及從其部分脫附幹細胞之方法
國立中央大學
2017/10/21
現今幹細胞的培養有二維培養(培養皿培養)和三維培養(微載體培養)方式,然而這些培養方式皆為批式而非連續的培養系統。在這些系統中幹細胞的培養分為三個步驟:(1)種入細胞並使細胞貼附於表面;(2)細胞增生;(3)收穫細胞。而在臨床的細胞治療上我們需要應用大量的幹細胞來進行,所以上述的步驟必須不斷的重複。在收穫幹細胞時通常都使用酵素使細胞從培養皿或載體表面上脫附下來,例如:在人類成體幹細胞的脫附會使用trypsin;在人類胚胎幹細胞及人類誘導多功能幹細胞上的脫附則使用dispase或accutase。此外,傳統培養幹細胞的熱感應培養皿、非熱感應培養皿、或微載體……等皆為拋棄式的耗材。因此若要以傳統培養幹細胞的方式來獲取大量幹細胞用於細胞治療上,這些耗材必然也需要大量的使用。 為了解決這種傳統培養幹細胞方法的瓶頸,我們發展了一種連續式收穫細胞的系統:利用部分細胞脫附於具有奈米刷的培養皿或載體,來達到連續收穫細胞的目的。在這種系統中一旦細胞培養在具有奈米刷的培養皿或載體後,收穫細胞時便不需要用到酵素來使細胞脫附。在收穫的過程中我們可以藉由以下方法來達到部分細胞脫附之目的:當細胞培養於熱感應培養皿或載體上時,我們只需降低培養液溫度便可達到使部分細胞脫附的目的;當細胞培養於具有奈米刷的培養皿或載體上時,我們可施予剪應力來使細胞產生部分脫附。故在此系統中我們可以從培養液裡持續地收穫部分脫附的幹細胞,而尚殘留在培養皿或載體上的幹細胞可以繼續在新的培養液中增長與繁殖。 To solve bottleneck of conventional stem cell culture system, we developed a continuous harvest method of stem cells by partial detachment of stem cells cultured on nanobrush-immobilized dishes and microcarriers. Stem cells are seeded on culture dishes or microcarriers, it is not necessary to use enzyme to detach stem cells from the surface but by decreasing the culture medium when stem cells are cultured on thermo-responsive surface or by adding shear stress on stem cells for detachment of stem cells from the surface immobilized nanobrush with partial detachment. The stem cells can be continuously harvested in the culture medium using the same culture dishes (flasks) or microcarriers. The remaining cells on dishes (flasks) or microcarriers are expanded in new culture medium. These processes (cycles) can be repeated on the same dishes (flasks) or microcarriers at many times, whereas the conventional culture system needs to use new dishes (flasks) or microcarriers.
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