用於檢驗具有抗線蟲基因之基因改造番茄的方法RAPID DETECTION OF GENETICALLY MODIFIED TOMATO RESISTANT TO ROOT-KNOT NEMATODE BY SEMI-QUANTITATIVE PCR

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

097143626

專利證號

I 377346

專利獲證名稱

用於檢驗具有抗線蟲基因之基因改造番茄的方法RAPID DETECTION OF GENETICALLY MODIFIED TOMATO RESISTANT TO ROOT-KNOT NEMATODE BY SEMI-QUANTITATIVE PCR

專利所屬機關 (申請機關)

國立中興大學

獲證日期

2012/11/21

技術說明

本研究為利用半定量聚合酶鏈鎖反應 (semi-quantitative polymerase chain reaction, SQ-PCR) 系統，初步估算檢測轉殖半胱氨酸蛋白水解酶抑制劑 (cysteine protease inhibitor)基因蕃茄中基因轉殖成份之含量。首先由自行設計以及參考文獻收錄的引子組進行二次確認，得知產物無偽陽性結果產生。並以CPI-2F/CPI-2R與TOM-IF/TOM-IR之引子組組合進行PCR。經由實驗顯示，TOM-IF/TOM-IR引子組除了轉殖番茄及非轉殖蕃茄中可擴增到266 bp目標片段，在其他作物 (如大豆、玉米及木瓜) 皆無擴增出此片段，表示此引子具有良好物種特異性；在外源性引子的部份，CPI-2F/CPI-2R (614 bp) 對於轉殖蕃茄之檢測亦具有良好的專一性。本實驗所建立之單、雙套式半定量PCR系統，其檢測靈敏度皆可達0.1%，而根據不同基因轉殖成分含量及其電泳膠分析亮度比值作圖之標準曲線，其相關係數分別為0.9744及0.9922，顯示雙套式半定量PCR檢測系統較單套式半定量PCR準確。當以不同之cycle數進行多套式PCR之結果顯示，以32 cycle之半定量分析結果為最佳。 本研究所使用之多套式PCR及半定量方法可容易檢出基因改造蕃茄之檢體，並可大幅降低檢測成本、時間與人力，盼此檢測方法之建立，能對基因改造食品之檢驗、標示有所助益，期有助於基因改造蕃茄之大量篩選及半定量分析。 In this study, we developed a method based on semi-quantitative PCR (SQ-PCR) to detect the cysteine protease inhibitor (CPI) gene in a transgenic tomato. We expect the system could qualitate and quantitate GM contents in food simultaneously. We designed the endogenous primers TOM-IF/TOM-IR (LAT52 gene) and exogenous primers CPI-2F/CPI-2R (CPI gene), which yielded PCR products of 266 bp and 614 bp, respectively. The primers showed high specificity in selecting transgenic tomato. In both simplex and duplex PCR detection systems, the detection limit of the systems were 0.1%, and according to the concentration of GM and the ratio of brightness of the correlation coefficient of semi-quantitative standard curve were 0.9744 and 0.9922, respectively. Results showed more accuracy in the duplex PCR system. Results from the multiplex PCR system with different cycles showed best semi-quantitation results at 35 cycles.

備註

本部(收文號1060063873)同意該校106年8月10日興產字1064300420號函申請終止維護專利

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