經分離之噬菌體溶菌蛋白PURIFIED LYSIN PROTEIN

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

104104373

專利證號

I 527829

專利獲證名稱

經分離之噬菌體溶菌蛋白PURIFIED LYSIN PROTEIN

專利所屬機關 (申請機關)

義守大學

獲證日期

2016/04/01

技術說明

目前病原菌抗藥性的問題相當嚴重，新抗生素的開發又需極長的時間，導致病患因無有效的抗生素使用，使的病情急遽惡化甚至死亡。尋找新的生物性防治或治療方式，將是解決病原菌抗藥性問題的另一個出路。噬菌體的治療在國外已經具有相當規模的研究及實際應用的例子，而其中噬菌體所分泌的溶菌蛋白 (lysin) 對於抑菌也有很好效果。Lysin蛋白研究在革蘭氏陰性菌方面探討的比較少，大部分都為陽性菌，因此本實驗結果將提供 lysin 蛋白在陰性菌新的研究結果。 目前研究成果，已利用 MOLDI-TOF/MS 分析Acinetobacter baumannii 噬菌體 phi km18p的溶菌蛋白，與 Phi km18p 基因比對後發現與 ORF13 有72%的 identity。將噬菌體 orf13 的基因選殖於表現載體 pET15 中得到重組質體 pElysin，並送入宿主 E. coli C43(DE3) 經IPTG 誘導後產生分子量約72 kDa 的蛋白，但此蛋白在細胞內容易形成三個單體聚合的結構，分子量約為 220 kDa。將此溶菌蛋白進行溶菌活性測試，在 In gel 蛋白活性測試，僅需 5 ng 的蛋白即可產生明顯的溶菌區域，但利用紙碇方式則需要 5 ug 才具有抑菌效果出現。分析溶菌蛋白的耐熱性，已發現當溫度高於 60 oC 處理30 分鐘後，溶菌蛋白則失去活性。 The orf13 gene of phi km18p was clone into expression vector pET15b to generate the recombinant plasmid pET693. The pElysin was transformed to host E. coli C43(DE3) and then induced by IPTG to overexpress the lysis protein with the molecule weight of 72 kDa, but this protein would easily form the trimers structure with 220 kDa in the host cells. Using in gel analysis process to exam the lysis activities of recombinant protein, only 5 ng protein was required to lysis bacterium and presented clear bands. When the lysin protein activity was test by paper disc method, we need 5 ug protein per disc to produce the inhibited ring on the bacterial lawn. On the heat stable examination, we found that the activities of ORF693 were destroyed when was incubated on 60oC for 30 min.

備註

依112.08.07.本會112年第2次研發成果管理審查會決議辦理 本會(收文號1120014620)同意該校112年3月10日來函1120002674號申請終止維護專利(義守大學)

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