特異性造成植物葉綠體基因變異的轉殖載體、套組、方法及利用其產生之轉殖植物細胞與農桿菌CLONING VECTOR, KIT, AND METHOD FOR SPECIFICALLY INDUCING MUTAGENESIS IN CHLOROPLAST GENES, AND TRANSGENIC PLANT CELLS AND AGROBACTERIUM GENERATED BY THE SAME

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

107114066

專利證號

I 686477

專利獲證名稱

特異性造成植物葉綠體基因變異的轉殖載體、套組、方法及利用其產生之轉殖植物細胞與農桿菌CLONING VECTOR, KIT, AND METHOD FOR SPECIFICALLY INDUCING MUTAGENESIS IN CHLOROPLAST GENES, AND TRANSGENIC PLANT CELLS AND AGROBACTERIUM GENERATED BY THE SAME

專利所屬機關 (申請機關)

國立成功大學

獲證日期

2020/03/01

技術說明

靜默葉綠體基因的表現，藉此去研究葉綠體基因的功能，需要藉由葉綠體基因轉殖技術來進行，但是葉綠體基因轉殖技術門檻高、轉殖效率低、篩選過程的時間寵長，且需投入的人力和物力甚多。因此本專利技術藉由建立細胞核轉殖重組TALEN (Transcription activator-like effector nuclease )基因技術來編輯葉綠體DNA，以調控植物葉綠體基因的表現，來取代葉綠體基因轉殖技術，以達到簡單、容易、迅速與便宜地研究葉綠體基因功能之效果。利用構築具有葉綠體訊息蛋白的細胞核重組TALEN基因表現系統, 將重組TALEN蛋白的N端接上葉綠體訊息蛋白，並由rbcS啟動子調控下游重組TALEN基因的表現。先將表現載體轉入農桿菌中，再利用農桿菌媒介法轉殖至植物 (菸草和阿拉伯芥)細胞核後，經由抗生素的篩選和PCR的分析，確認外源基因存在於植物細胞核中，而獲得轉殖重組TALEN基因的植物。轉殖植物的TALEN基因經過細胞核的轉錄合成出mRNA後，可於細胞質轉譯合成出重組TALEN蛋白，其可以藉由位於N端的訊息蛋白經由葉綠體膜的傳送通道(TOC-TIC complex)到達葉綠體基質，而分別特異性辨識並作用於目標葉綠體基因的特定位置，造成雙股DNA的斷裂，進而啟動葉綠體DNA的修復機制，可導致目標基因失去活性。本技術以葉綠體rpoB基因做為重組TALEN蛋白的辨識目標為例子，實驗結果顯示葉綠體rpoB基因序列發生變異，植物葉片也呈現不同程度的白化外表性狀。證實本專利技術的可行性。

備註

本會(收文號1120059850)同意該校112年9月7日成大產創字第1121102806號函申請終止維護專利(國立成功大學)

連絡單位 (專責單位/部門名稱)

企業關係與技轉中心

連絡電話

06-2360524

網址