鑑定鶉屬鳥類、雞屬鳥類與馬雞屬鳥類性別的方法以及鑑別鶉屬鳥類、雞屬鳥類與馬雞屬鳥類性別之核苷酸引子對Method for Phasianidae gender identification, nucleotide sequence for Phasianidae gender and nucleotide primer pair for Phasianidae gender

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

100139058

專利證號

I 534269

專利獲證名稱

鑑定鶉屬鳥類、雞屬鳥類與馬雞屬鳥類性別的方法以及鑑別鶉屬鳥類、雞屬鳥類與馬雞屬鳥類性別之核苷酸引子對Method for Phasianidae gender identification, nucleotide sequence for Phasianidae gender and nucleotide primer pair for Phasianidae gender

專利所屬機關 (申請機關)

高雄醫學大學

獲證日期

2016/05/21

技術說明

本研究的目的是針對藍胸鶉(Coturnix chinensis)和雞(Gallus gallus)所建立的高通量的性別鑑定方法。我們使用染色體解旋酶DNA結合蛋白(CHD)的Griffiths P2/P8引子擴增產物，無法在解離曲線分析(melting curve analysis; MCA)中，產生可區分性別的解離曲線。因此，傳統的P2P8引子在這兩種物種不適合高通量的應用。為了設計更好的引子，我們將藍胸鶉的CHD-Z和CHD-W基因進行clone與定序，並利用BLAST來進行分析。經由序列比對，我們重新設計一個雌性特有的CHD-W基因引子(W-cot-F1)和雌、雄性CHD-W/CHD-Z基因的共同引子(ZW-cot-F1)，分別與Griffiths的P2引子結合進行同步化PCR的解離曲線分析。藍胸鶉與雞使用引子對W-cot-F1/P2與ZW-cot-F1/P2進行PCR的擴增長度分別為315~318-bp和114 -bp，並且解離溫度(Tm)範圍為79.5~80 ℃及78.5~79 ℃。因此，雌性在解離曲線分析顯示兩個不同的解離溫度高峰(Tm)；可區別於雄性只產生一個高峰。因此，利用我們重新設計的引子去做real time PCR的解離曲線分析，可以提供藍胸鶉與雞的高通量性別鑑定方法。 The objective of this study was to develop a method for high throughput gender identification for both Coturnix chinensis and Gallus gallus. We redesigned a female-specific CHD-W primer (W-cot-F1) and a female/male (or CHD-W/CHD-Z)-common primer (ZW-cot-F1) to be used in combination with the Griffiths P2 primer for MCA-based PCR reaction. In C. chinensis and G. gallus, the amplicon lengths of W-cot-F1/P2 and ZW-cot-F1/P2 were 315~318-bp and 114-bp, respectively, and the melting temperatures (Tm) for W-cot-F1/P2 and ZW-cot-F1/P2 amplicons were about 79.5~80 oC and 78.5~79 oC, respectively. Accordingly, females are distinguished from males by displaying two distinct Tm peaks instead of one in MCA for high-throughput gender identification method for C. chinensis and G. gallus.

備註

連絡單位 (專責單位/部門名稱)

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