葉酸檢測方法及其檢測套組METHOD AND KIT FOR DETECTING FOLATE

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

100104771

專利證號

I 413771

專利獲證名稱

葉酸檢測方法及其檢測套組METHOD AND KIT FOR DETECTING FOLATE

專利所屬機關 (申請機關)

國立成功大學

獲證日期

2013/11/01

技術說明

移除葉酸的聚谷氨酸鍊[(glutamate)n]是利用高效能液相層析法檢測葉酸的必要步驟之一。目前一般傳統方法多採用的動物血清或組織萃取物來進行葉酸聚谷氨酸鍊[(glutamate)n]的移除。所須的檢體處理時間大約為數小時至數十小時不等。但因葉酸極其不穩定且不耐熱，在如此長時間的處理溫浴過程中會造成葉酸大量的破壞和流失，同時加入大量的動物血清或組織萃取物常會造成樣本的稀釋，而影響結果的可信度。同時，動物血清或組織萃取物的使用亦會增加實驗操作人員暴露在微生物感染的危險性。利用單株選殖的純化酵素，我們可以有效地將檢體處理的時間縮短至30分鐘，因此能大幅減低檢體處理時造成葉酸的降解流失與破壞。同時利用葉酸酵素將其所屬受質專一性地轉換為另一產物，不但可以提高辨識生物性檢體中葉酸在高效能液相層析的正確度與可信度，還可以將某些較不穩定且敏感度低不易偵測到的葉酸衍生物的訊號放大。因而得以快速地測定生物性檢體中多種以目前傳統處理法無法測到的葉酸衍生物之含量。 Assessing the content of folate derivatives in biological samples using HPLC is an important protocol in both medical research and food/drug industries. A critical step in this method is the de-conjugation of the folylpolyglutamate spieces with glutamyl hydrolase to form folate monoglutamates. Here, we describe a protocol that significantly shortens the time required for de-conjugation by using recombinant gamma-glutamylhydrolase. In addition, by adding 10-formyltetrahydrofolate dehydrogenase and dihydrofolate reductase, we are able to determine the content of folate species in biological samples that are often undetectable with conventional methods. This new method has been successfully used to measure the folate content in zebrafish embryos and cultured cells.

備註

本部(收文號1050039975)同意該校105年6月7日成大研總字第1054500403號函申請終止維護專利55件(成功)

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