高通量篩選高表現細胞之方法及由其篩選之細胞METHOD OF HIGH-THROUGHPUT SORTING OF HIGH EXPRESSION CELL AND CELLS SORTED THEREFROM

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

102139138

專利證號

I 516602

專利獲證名稱

高通量篩選高表現細胞之方法及由其篩選之細胞METHOD OF HIGH-THROUGHPUT SORTING OF HIGH EXPRESSION CELL AND CELLS SORTED THEREFROM

專利所屬機關 (申請機關)

臺北醫學大學

獲證日期

2016/01/11

技術說明

以哺乳動物細胞生產重組蛋白質藥物已是目前生物製藥的主流技術；然而，現今仍缺乏一套方便簡單的方法，可以高通量篩選最高蛋白質產能的細胞株。為了達成此目的，本案開發一套創新的暫時性膜蛋白表現技術，利用furin蛋白酶切位片段(RAKR)連接重組蛋白質與老鼠B7胞外-穿膜蛋白序列 (mouse B7, mB7)，藉由調控furin蛋白酶之活性以控制重組蛋白質的分泌或表現於細胞膜上；當以furin抑制劑 (Dec-RVKR-CMK) 抑制furin蛋白酶之活性時，重組蛋白質-RAKR-mB7會暫時地表現於細胞膜上，可藉由流式細胞儀細胞分選技術篩選細胞膜上高表現重組蛋白質-RAKR-mB7之細胞株；反之，在缺乏furin抑制劑後，細胞將轉變為可持續分泌重組蛋白之細胞株。重要的是，重組蛋白質-RAKR-mB7於細胞膜上的表現量與細胞分泌重組蛋白質之產量呈顯著正相關(R2=0.9165)。此技術亦適用於篩選溶酶體內高度表現重組蛋白質之細胞株(R2=0.9441)。此創新的暫時性膜蛋白表現技術是一套容易操作、可搭配FACS高通量篩選高產能細胞株的篩選平台，有效提升細胞生產重組蛋白質藥物之產量，降低生產成本，以供應臨床市場需求。此外，暫時性膜蛋白表現技術亦可作為一種重組蛋白質優化平台(mammalian cell display)，用於加速重組蛋白質(含抗體)之演化與功能性篩選。 Using mammalian cells to produce recombinant protein drugs has become the global mainstream of current biopharmaceutical markets. An accurate and high-throughput method for the effective selection of highest protein-yielding cell still awaits development. We developed a novel transiently protein-anchored system coupled with fluorescence activated cell sorting for the efficient selection of highest protein-yielding clone. A furin cleavage peptide (RAKR) was used to join a recombinant protein and the extracellular-transmembrane domains of the mouse B7-1 antigen (mB7).The recombinant protein-RAKR-mB7 can be transiently anchored on cell surface by using the furin inhibitor (Dec-RVKR-CMK) to block furin activity in trans-Golgi network, allowing us efficiently selecting the cells which highly express recombinant protein-RAKR-mB7 on cell surface. Once the furin inhibitor is removed, the cell can continuously secret the recombinant protein.

備註

本部(收文號1100069974)同意該校110年11月22日北醫校事字第1100003920號函申請終止維護專利(北醫)

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