核酸共軛物的液相合成法LIQUID PHASE SYNTHESIS OF A NUCLEIC ACID CONJUGATE

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

101149607

專利證號

I 471331

專利獲證名稱

核酸共軛物的液相合成法LIQUID PHASE SYNTHESIS OF A NUCLEIC ACID CONJUGATE

專利所屬機關 (申請機關)

高雄醫學大學

獲證日期

2015/02/01

技術說明

核酸應用於臨床疾病治療，肇始於一九九零年代的基因治療(gene therapy)技術之發展;過去二十年來，經由科學家對於基因沉默化(gene silencing)及RNA干擾(RNA interference)機制基礎研究的了解，現今設計利用特定核苷酸序列來直接治療人類疾病，不再是局限於學理探討遙不可及的夢想。但目前核酸藥物研發上最大的挑戰，在於如何將核酸傳送到特定細胞組織或細菌，並且能夠讓核酸有效的穿越細胞壁膜，以及脫離真核生物細胞內endosome進入細胞質，如此核酸才能在細胞內執行預期的基因表現抑制，達到具專一性且低副作用的疾病治療目標。為了發展更具專一性且低副作用的新穎核酸藥物，本專利申請根據本實驗室先前研發出之核酸two-step phosphoramidation反應，將該反應最適化，因此能更有效的合成任何胜肽-核酸的鍵結產物(peptide-oligonucleotide conjugates, POCs)，並且進一步應用phosphoramidation反應，發展更簡單且更有效的廣用性核酸螢光標定方法，協助我們利用流式細胞儀及共軛螢光顯微鏡檢測，最後追蹤證實POCs有效攝入人類肺癌A549細胞的機制與效能。本專利申請成功的最適化核酸two-step phosphoramidation反應，研發出更有效的合成POCs方法，並且證明該POCs確實能藉由帶正電的胜肽扮演木馬載體，順利的將核酸導入哺乳類細胞；這些結果對於未來有效開發具療效且低副作用的新穎擬似抗生素或抗病毒核酸藥物，提供重要的理論基礎及研發策略。 In the current patent application, we optimized previously developed aqueous phase two-step nucleic acid phosphoramidation to facilitate synthesis of peptide-oligonucleotide conjugates (POCs). We improved POC yields by exploiting 4(5)-methylimidazole, specific surfactants with defined concentrations and diamine derivatized peptides. Optimized aqueous phase two-step nucleic acid phosphoramidation was applied to efficiently conjugate peptides with oligonucleotides, with or without a disulfide-containing linker, to generate corresponding POCs with yields of 47-75%. Moreover, we exploited the optimized two-step nucleic acid phosphoramidation to developing a novel, simpler and more effective labeling method for conjugating nucleic acids with fluorophores. Studied by flow cytometry and laser scanning confocal microscope, we unequivocally demonstrated FITC-labeled POCs were taken up by A549 cells effectively.

備註

連絡單位 (專責單位/部門名稱)

智財保護與科技管理組

連絡電話

07-3138030

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