利用乳腺表現型基因轉殖動物系統生產具生物功能之人類第八凝血蛋白之方法TRANSGENIC ANIMALS PRODUCING BIOLOGICALLY ACTIVE HUMAN FACTOR VIII IN THEIR MILK DRIVEN BY MAMMARY-SPECIFIC EXPRESSION CASSETTE

專利類型

發明

專利國別 (專利申請國家)

中華民國

專利申請案號

093102866

專利證號

I287578

專利獲證名稱

利用乳腺表現型基因轉殖動物系統生產具生物功能之人類第八凝血蛋白之方法TRANSGENIC ANIMALS PRODUCING BIOLOGICALLY ACTIVE HUMAN FACTOR VIII IN THEIR MILK DRIVEN BY MAMMARY-SPECIFIC EXPRESSION CASSETTE

專利所屬機關 (申請機關)

國立中興大學

獲證日期

2007/10/01

技術說明

人類第八凝血因子(human factor VIII; hFVIII)係凝血過程之內在路徑中不可或缺之重要凝血因子﹔人體內一旦缺乏或減少hFVIII，將會引發不同程度之凝血功能問題，而導致所謂的A型血友病(hemophilia A)﹔目前血友病患係以血漿製劑或由正常人血液中純化之hFVIII蛋白進行針劑補充療法，然而因費用昂貴以及無法避免可能之血源病毒感染之危險，因此利用現代生物科技發展一種快速且廉價之非血源性hFVIII生物製劑具有其迫切性。本發明係開創一乳腺專一性表現之基因轉殖動物系統由乳汁中生產並純化具生物功能之hFVIII蛋白；此外，本發明更著手於重組釋泌訊息肽（包括-LA 19-aa與S1-CN 15-aa）之建構使外源基因產物在乳腺泡上皮細胞具有高效能之釋泌效果。經基因轉殖鼠與基因轉殖乳山羊之研發結果顯示此一乳腺表現型載體系統，可分別產製出相當高量具凝血活性之完整或B-domain剔除之重組人類第八凝血因子。此一技術平台可快速應用於多種非靈長類之基因轉殖哺乳動物身上，包括鼠、兔、綿羊、山羊、豬與乳牛等物種，進行人類第八凝血因子之生物藥劑產製，及其於基因轉殖乳之hFVIII蛋白純化方法。 The present invention provides improved mammary expression cassettes useful for the expression of genes at high levels in transgenic milks. In particular, the present invention provides recombinant signal peptide sequences derived from alfa-lactalbumin and S1-casein milk genes suitable for leading protein secretion in the mammary gland. These gene cassettes are capable of delivering different transgenic constructs which result in the production of full-length or B domain-deleted therapeutic levels of biologically active human FVIII in the transgenic animal in vivo. Within the scope of the invention are also method for producing the transgenic non-human mammal, such as mice, rabbits, goats, sheep, pigs and bovine species, capable of expressing human FVIII, and methods of making milk and methods of identifying protein from the transgenic milk.

備註

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